Caldo Nutritivo
FUNDAMENTO
Es un medio altamente enriquecido qua permita al crecimiento de la mayoría de bacterias.
COMPOSICIÓN
Peptona 10.0g
Extracto de carne 3.0 g
Cloruro de sodio 5.0 g
Agua destilada 1000.0 ml
PREPARACIÓN
Disolver los ingredientes al Baño María, enfriar y ajustar el pH a 7.2.
Repartir en tubos (10 ml/tubo) ó en balones de volumen necesitado conteniendo el volúmen requerido para al trabajo de laboratorio. Autoclavar a 121°C por 15 min.
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.
Caldo Peptonado
FUNDAMENTO
Es una agua peptonada que permite, mediante la adición de un reactivo específico, comprobar la reacción del indol.
COMPOSICIÓN
Peptona 20.0g
ClNa 5.0g
Agua destilada 1000.0ml
PREPARACIÓN
Se disuelve la peptona y el NaCl.
Cuando está a 50°C, se controla el ph a 7.0.
Se autoclava a 121°C x 15 min.
Se reparte 2ml por cada tubo de 10 x 100.
PROCEDIMIENTO
Se siembra la colonia por identificarse a partir del medio TSI o directamente del medio de aislamiento. Incubar por 24 horas a 37°C.
Luego de la incubación, agregar 3 ó 4 gotas del reactivo de kovacs, preparado de la siguiente manera:
Alcohol amílico o isoamílico 75ml
Ácido clorhídrico 25ml
Para-dimetil-amino-benzaldehido 5g
El reactivo debe ser preparado por lo menos 48horas antes y ser mantenido a 4°C.
INTERPRETACIÓN
La degradación del aminoácido triptofano contenido en la peptona,mediante una enzima produce un compuesto heterocíclico el indol, el cual en presencia del para-dimetil-amino-benzaldehido, en medio ácido produce un compuesto complejo coloreado,soluble en solvente orgánico, especialmente en el alcohol amílico, entonces se produce un anillo de color cereza y el microrganismo es Indol positivo. El complejo del triptófano con el p-DAR no es absorvible por el alcohol amílico.
En algunas circunstancias se suelen preparar el caldo úrea y el caldo INDOL en un mismo tubo. En este caso,se disuelven la peptona (del caldo peptonado) y los ingredientes del caldo úrea (excepto la úrea) en el B.M. y cuando el medio está a 50°C se agrega la úrea. Otras veces se agrega los ingredientes del caldo úrea sobre el agua peptonada estéril, cuando ésta 50°C y se esterlliza por filtración. Es un medio preparado asi, la lectura de úrea precede a la adición del reactivo KOVACS para el indol.
Es necesario recordar que para la úrea positiva el PH del medio es alcalino , y el rojo fenol vira al color cereza; mientras que para el indol el pH del medio es fuertemente ácido, por el HCL contenido en el reactivo KOVACS.
Por lo tanto una reacción es independiente de la otra, es decir, en el tubo puede leerse úrea positiva o indol positivo, o úrea negativa o indol positivo o viceversa, indistintamente.
Son úrea positivos: los Proteus.
Son úrea negativos: Shiguella, Escherichia, Salmonella, Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella , Serratia, Providencia.
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.
Caldo Triptosa
FUNDAMENTO
Para enriquecimiento, aislamiento, cultivo y diferenciación, sobre todo de brucellas, pero también de Estreptococcos, Pneumococcos, Meningococos, Listerias, Pasteurellas y otros microorganismos patógenos.
Aislamientos de razas de brucellas a partir de cultivos mixtos: La adición de violeta cristal sirve para la inhibición de la flora gram positiva.
Diferenciación de las especies de Brucella, en base a su sensibilidad frente a determinados colorantes: Adición de tionina y fuscina básica.
Este medio de cultivo constituye una buena base para la preparación de agar-agar. Investigación de brucella melitensis en hemocultivos: Adición de sodio citrato, como anticoagulante; la adición de agar-agar y el cultivo en atmósfera con 10% de CO2 aumentan el rendimiento en Brucellas.
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.
Agar Nutritivo
FUNDAMENTO
Es el caldo Nutritivo pero adicionado de Agar-agar. El medio sólido permite estudiar la morfología de las colonias.
COMPOSICIÓN
Peptona 10.0 g
Agar 16.0g
Cloruro de sodio 5.0g
Agua destilada 1000.0 ml
Extracto de carne 3.0g
PREPARACIÓN
Disolver los ingredientes al Baño María.
Controlar el pH a 7.2.
Autoclavar a 121°C por 15 minutos.
Repartir en placas Petri, 22 ml por placa.
PROCEDIMIENTO
Sembrar siguiendo el método de las estrías.
Incubar a 37°C por 24 horas.
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.
Agar Peptonado
FUNDAMENTO
Es un medio altamente enriquecido que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos difíciles de cultivar.
Peptona 6.0g
Casitona 4.0g
Extracto de levadura 3.0g
Extracto de carne 1.5g
Dextrosa 1.0g
Agar-agar 18.0g
Agua destilada 1000.0ml
COMPOSICIÓN
Disolver los ingredientes con ayuda del calor.
Controlar el pH a 7.0 y autoclavar a 121°C por 15 min.
Repartir en placa de Petri estériles.
PROCEDIMIENTO
Sembrar siguiendo cualquiera de los métodos ya conocidos.
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.