Agua Peptonada Alcalina (APA)
FUNDAMENTO
El enriquecimiento en este caldo favorece al aislamiento de Vibrio cholerae cuando hay pocos microorganismos, como en muestras de personas convalecientes y de portadores asintomáticos.
COMPOSICIÓN
Nutriente: Peptona
Inhibidor: Cloruro de Na
pH: 8.4 a 8.5
Temperatura de incubación : 35 -37°C
Tiempo de incubación : de 6 a 8 horas.
TÉCNICA DE INOCULACIÓN DE LA MUESTRA EN EL CALDO DE ENRIQUECIMIENTO APA
Con una pinza previamente flameada, tomar el hisopo proveniente del medio de transporte Cary Blair.
Introducir el hisopo en el caldo.
Incubar a una temperatura de 35 a 37°C por un periodo de 6 a 8 horas.
Realizar un subcultivo en el medio de TCBS (ver Agar TCBS).
Fuente: Manual de Procedimientos de Bacteriología Médica del CNDR/MINSA edición 2004
Caldo Selenito
FUNDAMENTO
El selenito de sodio inhibe el crecimiento de los coliformes, enterococos y stafilococos. No así a las Salmonellas, Proteus, Shigellas y Pseudomonas.
COMPOSICIÓN
Peptona 5.0g
Lactosa 4.0g
Selenito de sodio 4.0g
Fosfato di potásico 3.5g
Fosfato mono potásico 6.5g
Agua destilada 100.0ml
PREPARACIÓN
Se disuelven los ingredientes en agua destilada calentando hasta 45-50°C, repartir en tubos de 20x160, 10ml por tubo ( no se esteriliza ).
PROCEDIMIENTO
Un gramo de muestra se incorpora en un tubo con caldo selenito, si la muestra fuera dura se ablanda con solución salina estéril ( 1g-1ml ). Se incuba a 37°C por 24 horas, al término de los cuales se replica en medios de aislamiento selectivos ( Agar Salmonella Shigella, Agar Verde Brillante, etc ).
INTERPRETACIÓN
El medio de selenito es utilizado para el aislamiento de Salmonellas, Shigellas principalmente, a partir de heces, orinas, agua, alimentos, etc.
Al cabo de la incubación el medio adquiere una coloración rojiza por la oxidación del selenito a selenuro.
SeO3Na -------- O --------> Se + NaOH
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.
Caldo Tetrationato
FUNDAMENTO
El tetrationato inhibe el crecimiento de coliformes, mientras que las sales biliares y el verde brillante hace lo propio con los Gram positivos. Originalmente el medio no tiene tetrationato, éste se forma por oxidación del tiosulfato sódico merced al yodo contenido en la solución de lugol. El tetrationato formado se descompone en ácido sulfúrico, ácido sulfurosos y azufre; el carbonato de calcio neutraliza la acidez y coadyuva la estabilidad del tetrationato.
2 S2O3Na2 + I2 ------> Na+O3- SSSS O3Na +2INa
Tiosulfato Tetrationato
Na+O3- SSSO3Na --H2O--> H2SO3+ H2SO4+ 2S
COMPOSICIÓN
Medio base:
Peptona caseína 2.5g
Peptona de carne 2.5g
Mezcla de sales biliares 1.0g
Carbonato de calcio 10.0g
Tiosulfato sódico 19.0g
Agua 1000.0ml
Solución de lugol:
Yodo 30.0g
Yoduro de potasio 25.0g
Agua 1000.0ml
PREPARACIÓN
Se disuelven los ingredientes del medio base en agua destilada y en baño maría por 15 min. , agregar 12ml de una solución de verde brillante al 0.1% y repartir en tubos de 20x160 a razón de 10 a 15ml.
PROCEDIMIENTO
Sembrar más o menos un gramo de muestra, agregar 4 gotas de solución de lugol, dejar incubando a 37°C por 24 horas, replicar en medios selectivos.
Se utiliza este medio para el aislamiento de Salmonellas con excepción de Salmonella typhi.
Fuente: Medios de Cultivo en Microbiología Manual de Laboratorio. UNMSM. M. Mendo Rubio.