PRINCIPIOS GENERALES
• La siembra es el procedimiento por el cual se pone en contacto el microorganismo con un medio de cultivo, para que en condiciones óptimas de temperatura y tiempo de incubación pueda desarrollarse y multiplicarse in vitro.
• Siempre debe trabajarse cerca del mechero de Bunsen para flamear la boca del tubo o la placa Petri con el medio, antes y después de sembrar para evitar contaminaciones.
• Para sembrar en placa Petri es importante que la superficie del medio este completamente seca, para conseguir esto las placas deben quedar en reposo durante 2 horas.
MATERIALES
- Muestras para cultivar.
- Tubos y placas Petri con medios de cultivo.`
- Asas de siembra.
- Aguja de platino.
- Mechero de Bunsen.
MÉTODOS
a. Método por inoculación en medio líquido
1. El asa de siembra debe ser esterilizada en la llama (flameada)y enfriada.
2. Tomar con la asa de siembra una cantidad suficiente de la muestra.
3. Introducir el asa de siembra con la muestra hasta el fondo del tubo con medio líquido, sin tocar las paredes del mismo.
b. Método por estría en medio sólido en tubo
1. El asa de siembra debe ser esterilizada en la llama (flameada), y enfriada.
2. Tomar una pequeña muestra con el asa de siembra.
3. Deslizar el asa de siembra suavemente en zigzag en el tubo con medio sólido, empezando desde el fondo del tubo.
c. Método por dispersión - agotamiento en medio sólido en placa Petri
1. El asa de siembra debe ser esterilizada a la llama (flameada), y enfriada.
2. Tomar con el asa de siembra una cantidad suficiente de muestra.
3. El asa debe ser sostenida suavemente entre les dedos con cuidado de no hundirla en el medio.
4. Sembrar en el medie sólido en placa Petri, dividido en cuatro cuadrantes, inoculando la muestra en cantidades sucesivamente menores en cada cuadrante. Cada cuadrante presentará diferente distribución de colonias.
d. Método por puntura en medio semisólido en tubo
1. La aguja de platino debe ser esterilizada a la llama (flameada), y enfriada.
2. Tomar con la aguja de platino (o alambre recto), una pequeña cantidad de muestra.
3. Sembrar en el agar semisólido introduciendo la aguja en forma vertical. Debe tenerse cuidado en hacer que el trayecto de salida sea el mismo que el de entrada.
LECTURA E INFORME DE UNA MUESTRA CULTIVADA
• Una vez sembrada, se rotula correctamente para identificarla y se incuba 37 ° C.
• Algunos microorganismos requieren atmósfera con un 3 - 5% de CO2 y otros como los anaerobios que requieren una atmósfera privada de oxigeno (O2).
• El período de incubación para los microorganismos patógenos comunes es de 18 - 24 horas, al término del cual los cultivos se sacan del incubador, se observa su crecimiento estudiando sus características.
• Entre las características de las colonias se debe detallar:
- Forma:
Circular, elíptica puntiforme filamentosa, etc.
- Elevación:
Plana convexa, umbilicada, etc.
- Borde:
Entero, ondulado, dentado, filamentoso, etc.
- Superficie:
Lisa, rugosa, granular.
- Tamaño:
Medida del diámetro en milímetros.
- Consistencia:
Membranosa, cremosa mucosa, etc.
- Pigmentación:
Amarilla, blanca, gris negra, etc.
- Olor:
Pútrido, alcohólico, etc.
En ocasiones esta descripción puede llevar al diagnostico presuntivo del género y especie de que se trata.
• Posteriormente de una de las colonias, se debe hacer una coloración Gram para determinar:
- Morfología.
- Característica de la tinción.
- Agrupación.
• El aislamiento y pureza de la cepa aislada son indispensables. Debe pasarse a distintos sustratos para:
- Llegar a la identificación por pruebas bioquímicas.
- Realizar pruebas de sensibilidad antibiótica.
Fuente: Procedimientos de Laboratorio. Ministerio de Salud. INS. Perú.